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层流手术室是采用空气洁净技术对微生物污染源采取程度不同的控制，以达到被控制空间环境内空气洁净度适于各类手术之要求；每日手术结束后，有清洁工用标志明确、分区使用的卫生洁具将手术间打扫干净，关闭电动门，经1h层流后关闭空调系统。并提供适宜的温度、湿度，创造一个清新、洁净、舒适、细菌数低的手术空间环境，使患者在手术时组织受到尽可能少的损伤，并大大降低患者和医护人员的二次率，尤其是颅内手术和手术，保证患者术后能更快更好地恢复等。
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按手术有菌或无菌的程度，手术间可划分成以下5类：(1)Ⅰ类手术间：即无菌净化手术间，主要接受颅脑、心脏、脏器移植等手术。(2)Ⅱ类手术间：即无菌手术间，主要接受脾切除手术、闭合性切开复位术、眼内手术、甲状腺切除术等无菌手术。手术室建筑要求:手术室应设在楼上，是一个单独的建筑较好，但应距离外1科病房、血库、病理科、急症室等有关单位较近的地方，并以走廊相连接，以便于工作。(3)Ⅲ类手术间：既有菌手术间，接受胃、胆囊、肝、阑尾、、肺等部位的手术。
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在新风管道上采用双位控制的定风量装置，当手术室工作时，空调系统开启，排风机开启，新风管上的双控阀实施调节，满足室内正压要求;当手术室不工作时，空调机组关闭，排风机关闭，新风管上的双控阀开启，让新风进入室内维持正压和有序的压力梯度。采取上述方式形成有效的保障体系，既保证了手术室在正常工作期间整个手术部正常压力分布和空气的定向流动，同时也保证了手术室在非工作期间房间内的正压，保持手术室的洁净状态。手术人员穿上无菌手术衣后，只有腰部以上到肩的前缘、袖口到手肘上的10cm可视为无菌区。