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大肠菌群检测操作步骤

1 水样稀释

检测所需水样为100mL。若水样污染严重，可对水样进行稀释。取10 mL水样加入到90 mL无菌水中，必要时可加大稀释度，水样按照10倍逐级稀释。

2 定性反应

用100 mL的无菌稀释瓶量取100 mL水样，加入培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解后，放入44.5℃的培养箱内培养24h。

3 51孔定量盘法

3.1 用100 mL的无菌稀释瓶量取100 mL水样，加入培养基粉末，混摇均匀使之完全溶解。

3.2 将前述100mL水样全部倒入51孔无菌定量盘内，以手抚平定量盘背面以赶除孔气泡，然后用程控定量封口机封口。放入44.5℃的培养箱内培养24h。

3.3 无需稀释检测范围：1-200MPN/100mL粪大肠菌群（耐热大肠菌群）

4 97孔定量盘法

4.1 将100mL水样全部倒入97孔无菌定量盘内，其余步骤与6.3.1、6.3.2条款相同。

4.2 无需稀释检测范围：1-2419MPN/100mL粪大肠菌群（耐热大肠菌群）

酶底物法程控定量封口机

JY-2020酶底物法程控定量封口机是在原有型号JY-2019的基础上进行了调整。将内部电路移至顶部，防止因漏液而产生设备短路。设备挡板替换成金属材质，防止因碰撞而损坏。增加了一键排水功能，省去了操作人员手动清理漏液的麻烦。

JY-2020酶底物法程控定量封口机用于51孔定量盘和 97 孔定量盘加热封口作用，配合美国Colitag微生物培养基使用，提供24小时简单、准确的定量检测总大肠菌群、大肠埃希氏菌、粪（耐热）大肠菌群的实验方法；51 孔定量盘和 97 孔定量盘是根据传统方法MPN统计模型而设计的半自动定量方法，可定量检测出水样结果，替代滤膜、及多管发酵法检测水中微生物。

执行标准

符合《GB 3838-2002 地表水环境质量标准》

符合《CJ/T 206-2005 城市供水水质标准》

符合《GB/T 5750.12-2006生活饮用水标准检验方法》

符合《DB21/T 2368-2014海水中总大肠菌群和粪大肠菌群快速测定酶底物法》

符合《CJ/T51-2018城镇污水水质标准检验方法 耐热大肠菌群测定酶底物法》

符合《HJ 1001-2018国家环境保护标准 水质总大肠菌群、粪大肠菌群和大肠埃希氏菌的测定》

滤膜法(MF，membranefilter)滤膜法：是目前为流行的检测水中大肠群的方法。滤膜法的具体步骤是首先将一定量的水体样本注入0.45μm的滤膜过滤，经过抽滤，水中的细菌则被留在滤膜上，将滤膜贴于品红亚硫酸钠培养基上培养24h，温度为恒温37℃，这使得菌群因发酵乳糖而使得滤膜出现紫红色，通过计算滤膜上的菌落进而计算出单位样本中的大肠的数量。

用ISO9308－1规定的滤膜法测定水中大肠回收率均值为94.7%，批内变异系数小于10%，检出限为500mL水样可检出1个CFU。该方法费用较低、原理简单、利于推广，但检测时间相对较长、步骤繁琐、干扰因素多，不适于大量样品的分析，无法满足污染物品快速检测需求。

相化及抗原或的酶标记。基本原理是把抗原或在预先结合到某种固相载体表面，结合在固相载体表面的抗原或者保持学活性，测定时，将受检样本(含待测或抗原)和酶标抗原或按一定程序与结合在固相载体上的抗原或起反应，反应终止时，固相载体上酶标抗原或被结合量(复合物)即与标本中待检或抗原的量呈一定比例，经洗涤去除反应液中其他物质，加入酶反应的底物后，底物即被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，后通过定性或定量分析有色产物量即可确定样品中待测物质含量。由于酶的催化效率很高，间接地放大了反应的结果，使测定达到极高的灵敏度。